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四川感受态细胞厂家电话

点击次数:12发布时间:2019/1/11

四川感受态细胞厂家电话

更新日期:2019/6/17

所 在 地:中国大陆

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简单介绍:细胞能够从周围环境中摄取DNA分子,并且不易被细胞内的限制性核酸内切酶分解时所处的一种特殊生理状态称感受态(competence)。自然环境中细菌可以吸收外源遗传物质以增加自身对环境的适应性.淳麦生物科技___r四川感受态细胞厂家电话

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详细内容


 细胞能够从周围环境中摄取DNA分子,并且不易被细胞内的限制性核酸内切酶分解时所处的一种特殊生理状态称感受态(competence)。自然环境中细菌可以吸收外源遗传物质以增加自身对环境的适应性。人工感受态的形成, 需要低温和钙处理,这样可能破坏了细胞膜上的脂质阵列 ,Ca2 +与膜上的多聚羟基丁酸化合物、多聚无机磷酸形成复合物利于外源DNA 的渗入, 外部理化因素促进了感受态的形成   。


   上海淳麦生物科技有限公司在感受态细胞的研发面,实力雄厚,拥有了克隆、表达、酵母、发根和农杆菌5大类,共计百余种感受态细胞。在电击感受态面,拥有了大肠杆菌 电转化感受态细胞和农杆菌电击感受态种类,极大提高了客户在转基因以及文库构建面的成功率。


 


 


 JM110感受态细胞简要说明:


 CMbio JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR) ;是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株,提取得到的质粒DNA,可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割; lacIqlacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选,淳麦生物科技,四川感受态细胞厂家电话,上海淳麦生物科技有限公司,但转化效率不高,CMbio High5TM系列JM110感受态细胞经特殊工艺制纟作,经pUC19 质粒检测转化效率约107 cfu/μg。一般不用于质粒廾构建,只适用于质粒转化。


 


 电转感受态细胞操作说明:


 1. 0.2cm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,使乙醇充分挥发,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5cm以便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。


 2. 取-80℃保存的农杆菌感受态插入冰中5分钟,待其融化,加入1-5ug质粒DNA(质粒体积不大于6ul,应该用试剂盒抽提,双蒸水溶解),用手轻轻敲打管底混匀,立即插入冰中,用200ul枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中,盖上杯盖,空管保留待用。


 3.启动电转仪,设置参数:C=25uF,PC=200ohm,V=2V(此参数为Biorad 推荐,使用者也可按所用电转仪推荐的protocol操作),将电击杯快速放入电转槽中,淳麦生物科技,四川感受态细胞厂家电话,上海淳麦生物科技有限公司,电击完成快速插入冰中,加入700ul 无抗生素的LB并转移到感受态空管中,28℃振荡培养2~3小时。


 4. 6000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培养箱培养2-3天(当平板只含有50ug/ml kan 时,28℃培养48h即可;平板中同时加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 时,需28℃培养60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 则需要28℃培养72-90h)。


 


 


 


 


 

 感受态细胞操作说明:


 1、CMbio感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻,待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中),加入目的DNA并用手EP管底轻轻混匀,冰上静置25分钟。


 2、42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。


 5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


 


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