一、实验目的

1、进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，以美析UV-1700PC为例学习紫外分光光度计的操作。

2、掌握利用紫外分光光度法测定苯甲酸和山梨酸的吸收光谱图。

3、掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸和山梨酸及其钠盐和钾盐的含量。

二、实验原理

为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸和山梨酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂。

苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸（钠）在225nm处有大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸的含量。山梨酸具有α,β-不饱和羰基结构，在波长255nm处有π—π*跃迁的K吸收带，因此可根据它们的紫外吸收光谱特征可以对它们进行定性鉴定和定量测定。

由于食品中防腐剂用量很少，GB2760-2011 规定0.2-1.5g/kg，并且食品样品中其它的成分也可能对防腐剂的测定具有干扰作用，因此一般可预先将样品中的防腐剂与其它成分进行分离，再经过提纯和浓缩进行测定。常用的分离方法包括蒸馏法和溶剂萃取法等。

本实验采用溶剂萃取法，先用HCl溶液将样品进行酸化，再利用乙醚将这两种防腐剂品从样品中萃取出来，然后将乙醚蒸发，剩下的萃取物经过碱性溶液（NaOH）溶解与处理。后对照标准物质，利用紫外分光光度计对目的成分进行检测。

三、实验仪器和试剂

1.紫外可见分光光度计 UV-1700PC（上海美析仪器），25px石英比色皿，50mL容量瓶。

2.HCl溶液（1:1）、NaOH溶液（40g/L）、NaCl溶液（5%）。

3.苯甲酸钠标准溶液的配制

（1）苯甲酸钠标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的苯甲酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。

（2）苯甲酸钠标准溶液（32mg/L）：准确移取苯甲酸钠储备液32.00mL于1000mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。

（3）系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL 、2.00mL和2.50mL于5个10mL容量瓶中，用NaOH溶液稀释定容。得到浓度分别为1.6 mg/L、3.2 mg/L、4.8 mg/L、6.4 mg/L和8.0 mg/L的苯甲酸钠系列标准溶液。

4.山梨酸钾标准溶液的配制

（1）山梨酸钾标准贮备液（1.000g/L）：准确称量经过干燥的山梨酸钠1.000g（105℃干燥处理2h）于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。

（2）山梨酸钾标准溶液（16mg/L）：准确移取山梨酸钾储备液16.00mL于1000mL容量瓶中，加入蒸馏水稀释定容。

（3）系列标准溶液的配制：分别准确移取山梨酸钾标准溶液0.50mL、1.00mL、1.50mL 、2.00mL和2.50mL于5个10mL容量瓶中，用NaOH溶液稀释定容。得到浓度分别为0.8mg/L、1.6 mg/L、2.4 mg/L、3.2 mg/L和4.0 mg/L的山梨酸钾系列标准溶液。

四、样品处理

液体样品：酱油 、食醋取5mL，饮料取10mL于125mL分液漏斗中，加入盐酸溶液2mL进行酸化，用无水乙醚萃取三次，每次30mL，每次振摇1min。合并乙醚层于250mL分液漏斗中，用NaCl溶液洗涤2次，每次5-10mL。然后用索氏抽提器回收乙醚，用NaOH溶液溶解，定容至100mL备用 。

若用雪碧等碳酸饮料可直接移取饮料1.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，用NaOH稀释定容备用。

五、实验步骤略

六、关于我们

上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器域，不断开发出的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。

      美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。 

美析的总部及生产基地设在上海，营销中心设在北京，并在江苏、上海、山东三地建有研发基地。为充分利用各地的智力资源，美析与国内外的部分科研单位也进行了深层次的科研合作，不断将科研成果转化为生产力。为更好的服务于广大客户，美析仪器国内设有12家办事机构，度身定制符合您需求的应用解决方案，提高产品的附加值。在不断服务国内用户的同时，美析也与20多个国家的分销机构建立了深度的战略合作关系。 

原创作者：美析中国仪器有限公司