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标题elisa试剂盒操作方法您用对了吗?

发布时间:2019/4/12  来源: 劲马免疫学第三方检测中心   阅读次数:96        

    每位科研人员都有自己的一套操作流程,但是,您的操作流程是对的吗?
    操作流程需要准备什么样的工具,具体是怎样操作的,您清楚吗?下面就来给大家讲讲一般是有哪些操作方法。
    一般的操作方法分为双抗体夹心法和间接法,以下是两种方法的操作,欢迎您来查阅。
    双抗体夹心法
    1、包被:用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg∕ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。
    2、加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔。阴性对照孔及阳性对照孔)。
    3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
    4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
    5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
    6:、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在elisa检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
    间接法
    1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg∕ml,每孔加0.1ml,4℃过夜;
    2、次日洗涤3次;
    3、加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
    4、(同时做空白、阴性及阳性对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
    5、37℃孵育35-60分钟,洗涤;
    6、zui后一遍用DDW洗涤;其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6相同。
    可能有的科研人员有着除以上两种方法的其他方法,不管是用的哪种方法,最后都是想把自己的实验做出结果来。上海劲马实验设备有限公司通过多年探索、积累经验、积极推广,凭借优质的产品质量、专业的销售团队、高效细致的售前售中售后服务,品质卓越的产品等优势获得高校/医院/科研院/第三方检测中心的一致认可。如果需要代测,可咨询的司的业务人员。期待您的来电!

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