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猪伪狂犬病毒抗原ELISA检测原理

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资料简介

 猪伪狂犬病毒抗PRV-Ag)试剂ELISA

 

使用说: SU-A50167

 

l  血清体样 PRV-Ag)。

l  6个月

 

l  2-8

 

 

 

 

实验原理

试剂盒采双抗体夹心酶联免疫吸附试验ELISA。往预先包猪伪狂犬病毒抗原

 

PRV-Ag)捕获的包被微孔中依次加入标阴性和阳HRP标记的检测抗, 经过温育并彻底洗涤。用底TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作 用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中猪伪狂犬病毒抗PRV-Ag)呈正相关。用

酶标仪450nm 下测定吸光度OD ,判阴阳

 

 

 

样本处理及要求

1.    :全血本请于室温2小时或4夜后于1000g20分钟,取上清即可测, 或将标本放-20-80℃保,但应避免复冻融。

2.    :可EDTA或肝素为抗凝剂,标采集302 - 8°C 1000g20分钟, 或将标本放-20-80℃保,但应避免复冻融。

3.    细胞培养物上清或其它生物标1000g20分钟取上检测或将标本放-20℃ 或-80℃保存,但应避免复冻融。 注:标本溶血会影最后检测结果因此溶血标不宜进行此


需要而未提供的试剂和器材

 

1.    酶标仪(450nm

2.    高精度加样器及枪0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3.    37℃恒温箱

4. 蒸馏水或去离子水

 

 

试剂盒组成

 

名称

96 孔配置

48 孔配置

备注

微孔酶标板

12 ×8

12 ×4

阴性对照

0.3mL*6

0.3mL*6

阳性对照

0.3mL*6

0.3mL*6

 

检测抗-HRP

10mL

5mL

20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物 A

6mL

3mL

底物 B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

说明书

1

1

自封袋

1

1

 

注意事项

1.    严格按照规的时间和度进行育以保证确结果所有试剂必须在使用达到室 温 20-25℃。使用后立即冷藏保试剂。

2.    洗板不正确以导致不确的结。在加入物前确尽量吸干内液体。温过程中 不要让微孔干燥掉。

3.    消除板底残留的液和手指印,否影响 OD 值。

4.    底物显色液应呈无或很浅的颜色已经变蓝的物液不能使

5.    避免试剂和标本的叉污染以免造错误结果。

6.    在储存和温育时避强光直接照射。

7.    平衡至室温后再打密封袋以防水凝聚在冷板上。

8.    任何反应试不能接触白溶剂漂白溶剂散发的烈气体。何漂白成分会破坏 试剂盒中反应试剂生物活性。

9.    不能使用过期产品。

10. 果可能播疾,所有样品应管理,按规定的序处样品检测装

 

 

试剂准备


试剂盒从冷藏环境取出应在室温衡后方可使

 

20×洗涤缓冲液的稀释蒸馏水120稀释,120×洗涤缓冲液19份蒸馏水。

 

 

 

操作步骤

1.    从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用密封放回 4℃。

2.    设置阴性对阳性对照本孔,阴性阳新对照各加 50μL 对照品;

3.    样本孔中加入待样本 50μL;空白孔加。

4.    除空白孔外标准品和样孔中每加入辣过氧化HRP)标记的检

100μL,用封板膜住反应孔37水浴锅或恒箱温育 60min

5.    弃去液体,吸纸上拍干每孔加满洗350μL,静置 1min,甩去洗涤,吸水纸 上拍干,如此重复洗板 5 次(也可洗板机洗板

6.    每孔加入底物 AB 50μL37℃避光孵育 15min

7.    每孔加入终止液 50μL15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

 

 

 

实验结果计算

1.  阴性对OD值:小0.2

2.  阳性对OD值:大0.8

3、阳性判断(Cut-Off:阴性对照OD+0.15,样本OD判定为阳性,之, 为阴性。

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