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HIF-a人肺细胞培养说明书

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资料简介

对于贴壁细胞,若细胞漂浮:培养瓶不开封,用75%酒精擦拭后平躺置于培养箱内。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,换成新鲜的培养基;如细胞还不贴壁,将细胞离心收集移到新的培养瓶中,原培养瓶加部分新鲜培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。对于悬浮细胞:收到细胞后,将细胞全部离心,去掉旧的培养基,换成新鲜的培养基继续培养。
特别注意:(如使用公共实验室或者初次接触,建议添加双抗培养)
(1)贴壁细胞收到当天有少量或没有飘忽的细胞可以当天换液,因为路途颠簸造成大量飘忽的情况时,请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
(2)收到细胞后请尽快更换为含10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清,(原瓶培养基的继续使用时间zui长不宜超过72小时)
(3)如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并江林技术人员
细胞接收后的操作流程与注意事项:
1)贴壁细胞生长缓慢;适当提高血清浓度(zui高不能超过20%),或可根据该细胞生长特性生长密度,考虑胰酶消化后,转移到新的培养瓶继续培养
2)如果细胞为贴壁细胞,而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态,请将悬浮的细胞即时离心,加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天;同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡,请及时实验室技术人员会跟进解决
3)生长不均:贴壁细胞若出现分布不均,成岛状生长,可将细胞进行消化,重悬打散细胞,加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)
(1)吸出原培养瓶中的培养基,PBS缓冲液润洗细胞两次,加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间,通常控制在1-2min)
(2)注意培养基PH值变化情况,定期换液(每周2-3次),待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
(3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中,添加适当的完全培养基,把细胞悬液打匀,于培养箱中培养
(4)镜下观察消化情况,在细胞生长特性边缘缩小,贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶,加6-8ml完全培养基,轻轻吹打细胞层,尽量把细胞层吹落,吹散。
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