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“上海沪鼎”文献:加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶作用机制研究

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资料简介

“上海沪鼎”文献:加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶作用机制研究
李燕红 杨 谦 李锦亮 庄锦填 李振洁 钟金宝

【摘     要】   目的     探讨加味当归芍药散抑制组蛋白乙酰化酶p300(p300HAT)/血清环加氧酶-2(COX-2)通路调控核因子 E2相关因子2(Nrf2)在黄褐斑形成中的作用机制。方法     健康人表皮黑素细胞及30只雌性小鼠纳入研究,采用不同浓度加味当归芍药散处理健康人表皮黑素细胞,肌肉注射黄体酮及紫外线照射建立黄褐斑小鼠模型,将小鼠随机分为空白组、低剂量组及高剂量组各10只,分别给予常规剂量0.9%氯化钠注射液、低剂量及高剂量加味当归芍药散处理,检测不同浓度处理下细胞活力、细胞黑素含量及细胞中p300HAT、COX-2及 Nrf2的 RNA 及蛋白表达量,同时检测治疗前后3组小鼠皮肤及肝脏的p300HAT、COX-2及 Nrf2的 RNA、蛋白质表达量。结果加味当归芍药散浓度为1.0mg/mL 时健康人表皮黑素细胞活力较对照组明显低,差异有统计学意义(P <0.05);加味当归芍药散处理的健康人表皮黑素细胞p300HAT、COX-2的 RNA 及蛋白表达量和黑素相对含量较对照组明显低,Nrf2的 RNA 及蛋白表达量较对照组明显高,且随着加味当归芍药散浓度增加,健康人表皮黑素细胞 p300HAT、COX-2、Nrf2的 RNA 及蛋白表达量降低、升高越明显,健康人表皮黑素细胞黑素相对含量降低越明显,差异有统计学意义(P <0.05);治疗后仅低剂量、高剂量组p300HAT、COX-2的 RNA、蛋白表达量较治疗前明显降低,Nrf2的RNA、蛋白表达量明显升高,且治疗后高剂量组各项指标变化较低剂量组明显,差异有统计学意义(P <0.05)。结论   加味当归芍药散治疗黄褐斑的机制可能与其抑制p300HAT/COX-2通路调控 Nrf2表达有关。
【关键词】   黄褐斑; 环氧化酶2; 加味当归芍药散; p300HAT; Nrf2
黄褐斑属于临床常见面部皮肤黑色素沉着疾病,易诊难治,病因与日晒、内分泌失调、遗传、情绪 及化妆品等有关,临床对其治疗尚缺乏单一特效药。近年来,运用各种中药治疗黄褐斑并取得了一定的临床疗效[1]。现阶段临床对黄褐斑发病机制尚未完全明确,一项研究表明环加氧酶-2(COX-2)催化花生   四烯酸合成的具有生物学活性的前列腺素衍生物可进一步转化成消炎、抗氧化的亲电羰基衍生物分子, 并可解离转录因子核因子 E2 相关因子2(Nrf2),激活多种与抗氧化相关的含抗氧化反应元件(ARE)应答元件的基因,COX-2调控 Nrf2可能与其抗炎及抗氧化机制有紧密联系[2],其在黄褐斑形成中可能发挥一定作用,此 外 COX-2 的表达与共激活因子p300HAT 的转录调控相关[3]。而近期一项研究指出当归芍药散具有显著的抗氧化、清除自由基等作用[4],因而本项目在既往研究基础上开展检测加味当归芍药散作用人表皮黑素细胞生长情况以及组蛋白乙酰化酶p300(p300HAT)、COX-2 及 Nrf2 的表达水平,并建立黄褐斑小鼠模型,对其实行加味当归芍 药 散 灌 胃 处 理 , 并 检 测 小 鼠 皮 肤 、 肝 脏 的
p300HAT、COX-2及 Nrf2 的表达水平,通过体外细胞实验及体内动物实验研究,探讨加味当归芍药散治疗黄褐斑的有关机制。
1 材料与方法
1.1  材料:30只雌性昆明种小鼠由上海西普尔-必凯实验动物中心提供,小鼠体质量18~20g,平均体质量(19.6±0.3)g;健康人表皮黑素细胞株由中南大学湘雅医学院肿瘤研究所提供。主要试剂及仪器:①主要试剂:由南京建成生物工程有限公司提供的丙二醛试剂盒(批号:20130517)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号:20140319)、总蛋白定量测试盒(批号:20140319),由上海沪鼎生物科技有限公司提供的酪氨 酸 酶 酶联 免 疫 吸 附 试 验(ELISA)试剂盒,由上海通用药业股份有限公司提供的黄体酮注射液(批号:130404),四甲基偶氮唑蓝、二甲基亚砜由上海华美生物工程公司提供;②主要仪器:中波紫外线治疗仪由 Sigma 公司提供,DG3022A 型酶标仪由华东电子管厂提供,由美国Milipore公司提供的 Direct-Q 型超纯水仪,德 国
IKA 公司提供的IKA T18B 型组织匀浆机,美国Beckman公司提供的 Couvter高速冷冻离心机。

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