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豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)ELISA试剂盒

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资料简介

 
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
 
样本处理及要求
1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
2.  
血浆EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20-80保存,但应避免反复冻融。
3. 
组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mLPBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
需要而未提供的试剂和器材
1.       酶标仪(450nm
2.       高精度加样器及枪头:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL
3.       37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
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