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劲马文献:大鼠(IL-4)ELISA试剂盒在文献中的应用

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资料简介

Th9 细胞相关因子在肺纤维化大鼠中的作用
鲍文华 王瑾 李树民 杨晓东 马雪梅
佳木斯大学附属第一医院呼吸内科( 黑龙江佳木斯 154000)

【摘要】 目的 研究 Th9 细胞相关因子 PU. 1、干扰素调节因子 4( IRF4) 、白细胞介素 4( IL-4) 在肺纤维化大鼠中的作用。方法 将 90 只 SPF 级 SD 大鼠分为健康对照组、肺纤维化组和地塞米松干预组,每组 30 只。每组分别在饲养第 7 d、第14 d、第28 d 各处死 10 只。气管内注射博来霉素制作肺纤维化模型。实时荧光 PCR 检测支气管肺泡灌洗液( BALF) PU. 1、IRF4 mRNA 的含量,ELISA 法检测外周血 IL-4 含量。结果 健康对照组大鼠在各时间点肺组织结构完整,无炎症反应和纤维化改变。肺纤维化组大鼠肺组织早期为肺泡炎表现,肺间质和肺泡腔内可见大量巨噬细胞等炎症细胞浸润;第 14 d 部分肺泡结构消失,炎症细胞浸润稍减少,肺泡间隔增宽,成纤维细胞增生; 第 28 d 肺泡结构破坏,部分肺泡壁塌陷,肺泡间隔明显增宽,细胞外基质增生,肺组织呈广泛纤维化改变。地塞米松干预组肺泡结构存在,炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、肺纤维化程度明显轻于肺纤维化组。肺纤维化组各时间点 BALF 中 PU. 1 mRNA 含量明显高于健康对照组。与肺纤维化组比较,地塞米松干预组PU. 1 mRNA 含量第 14 d 和第 28 d 明显减低,差异有统计学意义( P < 0. 05) 。肺纤维化组 PU. 1mRNA 在第 7 d 表达增加,第 14 d 达到高峰,第 28 d 有所下降。肺纤维化组各时间点 BALF 中 IRF4mRNA 含量明显高于健康对照组,差异有统计学意义( P < 0. 05) 。与肺纤维化组比较,地塞米松干预组第 28 d IRF4 mRNA 含量明显减低,差异有统计学意义( P < 0. 05) 。肺纤维化组第14 d BALF 中IRF4 mRNA 含量与外周血 IL-4 含量呈正相关( r = 0. 044,P < 0. 05) 。结论 Th9 细胞在致大鼠肺纤维化中起作用,该作用与转录因子 PU. 1 和 IRF4 有关,IL-4 可能通过激活 IRF4 调控 Th9 细胞。

【关键词】 肺纤维化; Th9; 转录因子; PU. 1; 干扰素调节因子 4肺纤维化是一种病因不明的弥漫性肺间质性疾病,以肺泡炎症、成纤维细胞增殖、细胞外基质沉积为特点的疾病。研究表明,纯化的 T 细胞可以刺激成纤维细胞增殖,进一步导致细胞外基质沉积[1]。Th9 细胞是一种炎症细胞,目前认为 Th9 细胞功能具有双向性,既可以促进炎症,亦可以抑制炎症发生。PU. 1 和干扰素调节因子 4( IRF4) 是目前公认的 Th9 细胞相对特异性的转录因子[2],白细胞介素4( IL-4) 是 Th9 细胞的诱导因子之一。Th9 细胞作为辅助性 T 细胞的一个新亚群,已有实验表明细胞在支气管哮喘和溃疡性结肠炎等炎症和免疫性疾病中起作用,但在肺纤维化疾病中鲜少研究。本实验观察肺纤维化大鼠 PU. 1、IRF4 的表达量,探讨 IRF4和 IL-4 的关系,旨在阐明 Th9 细胞相关因子在肺纤维化中的作用。材料与方法
一、材料
博来霉素购自 Sigma 公司,大鼠 IL-4 ELISA 试剂盒由上海劲马公司提供,Trizol 试剂、逆转录试剂盒、SYBR Green 荧光定量 PCR 试剂盒由哈尔滨海基生物公司提供。光学显微镜为奥林巴斯公司产品,酶标仪为 Bio-Rad 公司产品,PCR 仪为 Bio-RadMin-Opticon2。


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