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国产小鼠糖原合成酶激酶（GSK）酶联免疫试剂盒
l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中小鼠糖原合成酶激酶（GSK）的含量。
l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
l 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠糖原合成酶激酶（GSK）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠糖原合成酶激酶（GSK）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
实验材料与试剂配制
1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。
样品收集、处理及保存
1）.细胞培养上清：
适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。
2）细胞：
用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106/ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。
3）血清：
在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。
4）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上清。
5）体液：
包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。
6.）组织标本：
切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。
样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
7）保存：
如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作步骤
1）取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3）标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。
10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11）终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12）读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。
数据计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，即为样品的实际浓度。
注意事项
1）实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。
2）加样：加样时，要控制加样速度，避免*孔与zui后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。
3）孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化，如果颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
4）建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
5）建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，试用几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可和所购经销商，如果因运输过程导致试剂盒失效，可要求调换，但概不承担产品本身以外的任何损失。
上海恒远生物科技有限公司于2010年成立，是一家生物技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发及销售。主要产品有进口RD、BIM、TSZ ELISA试剂盒、国产elisa试剂盒、猪elisa试剂盒、鸡elisa试剂盒、elisa试剂盒价格、血清、抗体、生物科研试剂、实验耗材等。公司目旗下有员工500余人，ELISA试剂盒年100万盒，年销售额近2亿元。公司自成立以来，就非常注重企业信息化的建设，我们采用了先进的内部供应链信息处理平台，保证客户订单的准确、高效处理。我们的客户关系管理系统和客户关系管理团队，能率先时间响应客户的售、售后需求，关注客户体验及满意度。我们拥有上百名业的技术人员，为您提供业、耐心的服务。我们业，所以值得信赖；我们注，所以我们高速发展；我们信奉“客户至上”，我们坚持“诚信创新，合作共赢”；我们将竭尽所能，为您提供便捷、业的采购服务，节省您的时间和成本。 我们坚信，经过我们的不懈努力，上海恒远生物科技有限公司将成为“生命科学及化学域业、规模较大、品种全及配套服务完善的业供应商”，为用户在生化科学域提供“一站式”服务，成为这个行业的dao者。企业文化上海恒远生物科技有限公司企业文化企业口号诚信创新，合作共赢企业愿景严格的质控体系，建立和完善企业制度，创造性发展，成为一家科研服务行业航者。企业使命为客户：创造至精至诚的优质产品与服务为员工：创造公平并富创造性的成长空间为社会：提供业先进的检测机构企业核心价值观业、诚实、守信、创新经营理念承诺、卓越、共赢、发展、感恩人才理念以人为本、唯才善用上海恒远生物科技有限公司奉行“以人为本、唯才善用”，提倡“人是核心资本”，公平合理并创造性地使用人才，尽可能的给员工提供足够的舞台去发挥去成长。公司尊重人，尊重每一位员工的个性，尊重员工的个人愿望，尊重员工的选择权利。依托这样的人才观。恒远将进一步完善科学合理的人力资源管理机制，造就一个良好的人才成长空间。
