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标题ELISA原理实验条件和技术要点

   

提供者:上海古朵生物科技有限公司    发布时间:2016/6/23   阅读次数:196次 >>进入该公司展台
ELISA原理实验条件和技术要点

古朵生物技术告诫:在应用ELISA时,首先要清楚下面内容:

1,是检测抗体还是抗原?

2,检测的结果是定性还是定量?

3,是否需要检测特异抗体的类型?

4,所用抗体/单克隆抗体的亲和力怎样?

(1)检测抗原  最常用于检测抗原的方法是非竞争性的双抗体夹心法,其次是竞争法。但竞争法在具体实验中有些困难,特别是检测微生物的抗原,因为需要标记抗原,这对于某些抗原是很难做到的,甚至是不可能的。另外在竞争法中,酶标记的抗原与标本直接混合在一起,许多标本中含有酶抑制剂或蛋白A样物质,可影响ELISA的结果。

(2)检测抗体  检测抗体种类常用的方法是检测抗体种类的捕获法,这个方法常用于检测特异性IgG、IgA和IgM.。这个方法的第一步是捕获所需要检测的一个种类的抗体,接下来是检测捕获的抗体是否是特异性抗原的抗体。间接ELISA在检测IgG时比较简单,但不适用于检测其他种类的抗体,因为血清中如果有特异IgG存在将与IgM或IgA等竞争结合抗原。

竞争法检测抗体有两种方法:一种是将标记的抗体和标本同时加入反应孔内,但标记的抗体和标本中的抗体必须是结合抗原的不同决定簇;另一种是先加标本,冲洗后再加标记的抗体。竞争法检测抗体比间接法容易判断结果,并且比较敏感和特异。不论选择哪种方法,ELISA都包括6个步骤:1,抗原或抗体吸附于固相;2.加标本和试剂;3,孵育和冲洗;4,加酶标抗原或抗体;5,加适当的底物;6,检测和分析结果。

虽然ELISA法在理论上十分简单,但每一步都有要注意的事项。不论是新设计的ELISA还是沿用其他ELISA方法都有以下几方面技术要点:固相载体的选择和试剂的制备,反反应条件和操作的标准化。


关键词:人ELISA试剂盒/进口ELISA试剂盒/ELISA检测试剂盒  

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