维生素E含量试剂盒资料For Research Use Only
仅供研究用
货号:QYS-237034
维生素 E(Vitamin E,VE)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
维生素E含量试剂盒资料维生素 E(Vitamin E)是一种脂溶性维生素,其水解产物为生育酚,是生物体中最主要的抗氧化剂之一,能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤,维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能,具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用,在、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。
测定原理
VE 还原 Fe3+为 Fe2+,Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物,在 530nm 有特征吸收峰。
天平、研钵、离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、漩涡震荡仪。
试剂组成和配制
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理
1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.2g,加入 1mL 提取液)加入提取液,充分匀浆后用提取液定至 2mL,在漩涡混匀仪上震荡 5min,于
25℃,5000g 离心 10min,取上层测定。
2.细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 1000 万细胞加入 2mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);在漩涡混匀仪上震荡 5min,于 25℃,5000g 离心 10min,取上层测定。
3.血清:取 0.2mL,加 1.9mL 提取液,漩涡仪混匀上震荡 5min,于 25℃,5000g 离心 10min,
取上层测定。
测定操作
对照管测定管
样品(μL)500500
试剂一(μL)100100
试剂二(μL)100
试剂三(μL)100
充分混匀,25℃反应 5min
试剂四(μL)300300
充分混匀,于 1mL 玻璃比色皿,无水乙醇调零,测定 530nm 处吸光值,记为 A 对照管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 对照管。
计算公式
维生素E含量试剂盒资料
4.标准曲线:y = 0.022x + 0.0065, R2 = 0.9978
1. 按照蛋白含量计算
VE 含量(μg/mg prot)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V 反总÷(V 样×Cpr) = 181.8×(△A -0.0065)÷ Cpr
2. 按照样本质量计算
VE 含量(μg/g 鲜重)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V 反总÷(V 样×W÷V 样总) = 181.8×(△A -0.0065)÷ W
3. 按照细胞数量计算
VE 含量(μg/104 cell)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V 样总) = 181.8×(△A -0.0065)÷ 细胞数量
4. 按照液体体积计算
VE 含量(μg/mL)=(△A -0.0065)÷ 0.022×V 反总÷V 样×20 = 1818×(△A -0.0065)
V 反总:反应总体积,1mL;:V 样:加入样本体积,0.5mL;V 样总:加入提取液体积,2mL;
Cpr:蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g
注意事项
1.若反应体系产生沉淀,需要将样品进行适当的稀释,并在计算公式中乘以稀释倍数。
2.最低检出限为 29.5μg/g。