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标题DEPC 操作误区你了解多少吗?

   

提供者:上海远慕生物科技有限公司    发布时间:2018/9/3   阅读次数:264次 >>进入该公司展台
误区一:重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。
 
由于 DEPC 较贵,而且书上说 DEPC 要用高压灭菌处理去除,于是有些人就萌发了重复使用 DEPC 的想法,即对含有 DEPC 的水不进行高压灭菌,从而重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。
 
节约本是好事,但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含 DEPC 的水?因为 DEPC 在水溶液中不稳定,极易分解,DEPC 在 pH 6.0 和 pH 7.0 的 PBS 缓冲液中的半衰期分别约为 20 min 和 10 min,DEPC 在水中的半衰期约为 30 min。因此,重复使用含 DEPC 的水就不能保证枪头和离心管的 RNase-free。
 
误区二:必需长时间高压灭菌来彻底去除 DEPC。
 
用 DEPC 处理过的溶液,在 15-20 min 的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味,因此有人认为高压灭菌去除 DEPC 不彻底,所以要延长高压灭菌的时间以完全去除 DEPC。
 
但是延长高压灭菌的时间并不需要,因为闻到的特殊香味不是 DEPC 的,而是 DEPC 分解产物之一的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸(如甲酸和乙酸等)反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的 DEPC 残留。
 
误区三:溶液中 DEPC 含量约高,灭活 RNase 的效果越好。
 
这个误区错了一半,的确,1% DEPC 能灭活高达 1000 ng/ml 的 RNase A,而 0.1% DEPC 只能灭活少于 500 ng/ml 的 RNase A。但是溶液中残留的 DEPC 副产物会抑制一些酶反应,例如 DEPC 副产物会抑制体外转录反应,因此 DEPC 含量越高,高压灭菌后的 DEPC 副产物就越多,抑制越明显。

关键词:DEPC  DEPC操作误区    

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