标题远慕生物简介:基因组DNA提取方法

基因组DNA提取方法

        制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。主要是CTAB方法，其他的方法还有1物理方式:玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法。2化学方式：异硫氰酸胍法,碱裂解法3生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有:硅质材料、阴离子交换树脂等


试验步骤：

1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，氯仿，异戊醇）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相

6、用等体积的氯仿，异戊醇抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。

2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠（PH5.2）与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。



 

公司主要代理产品：

 

试剂盒：ELISA试剂盒、检测试剂盒、免疫组化试剂盒、放免试剂盒、分子生物学试剂盒、金标检测试剂盒、Omega试剂盒、细胞凋亡试剂盒、生化试剂盒。

 

各种动物血清：内皮细胞专用血清、Hyclone、GIBCO胎牛血清。

 

抗体：进口原装抗体、进口分装抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、单标抗体、双标抗体、多标抗体、一抗、二抗；免疫组化抗体、免疫荧光抗体、流式细胞抗体、免疫细胞化学抗体。

 

细胞：原装进口细胞、肿瘤细胞、正常细胞、肿瘤耐药细胞。

 

耗材：细胞培养耗材、普通实验耗材。

 

生化试剂：原装进口生化试剂、进口分装生化试剂。