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标题对动物ELISA试剂盒特点及选择的大改观

   

提供者:上海沪鼎生物科技有限公司    发布时间:2018/12/26   阅读次数:407次 >>进入该公司展台
    ELISA试剂盒的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特定的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化有重要意义。在ELISA的选择中主要包括:①固相载体的选择;②包被抗体(或抗原)的选择;③酶标记抗体工作浓度的选择;④酶的底物及供氢体的选择。
     
    随着人们对病原体感染与机体免疫应答的逐步认识,以抗原抗体特异反应为基础的,更为快速简便的免疫检验方法就应运而生了。

    试验中各个操作步骤常出现问题的原因及解决办法总结于下,希望能够对一些初步学习者有所帮助:这些难于采用传统培养方法检测的病原体感染诊断治疗的要求,迫使人们必须去寻找其他的检测途径,直接的或是间接的。

    ELISA试剂盒的特点是可以同时进行大量标本的检测,并可在特定的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量反应板型的ELISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化有重要意义。

··选择合适的ELISA试剂盒使用
    细胞分离ELISA试剂盒的工作原理主要有两种,正向选择和负向选择。正向选择ELISA试剂盒,使用与目标细胞直接结合的抗体来进行捕获。

    这种抗体通常与磁珠相连,可以利用磁铁将悬液中的抗体-磁珠-细胞复合物提取出来,再通过二抗将磁珠与目标细胞分开。负向选择的试剂盒也采用类似的抗体包被磁珠,不过这种试剂盒是通过去除样品中的非目的细胞,来间接捕获目的细胞。

  第一,固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

  第二,包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

  第三,酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

  第四,酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

关键词:ELISA试剂盒  

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