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标题细胞消化知识你知道多少?

   

提供者:上海远慕生物科技有限公司    发布时间:2019/1/10   阅读次数:341次 >>进入该公司展台
无论是原代细胞还是细胞系或癌细胞,细胞长满瓶后,需要对细胞进行传代或将细胞收集起来用作其他实验。贴壁生长的细胞必须要做的一步便是消化过程,下面便对细胞消化、中和、洗涤等过程做个简单介绍。
sciencell胰酶消化液
1绝大部分细胞消化的时候是只需用胰酶润洗一遍即可,吸去胰酶后,残留胰酶附着在细胞表面在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,这样连续传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。
2什么算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙状移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,就应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性。细胞只要能从基质上脱离下来,这个时候即使是成片的,吹打不超过20次后(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右),是正常的,不要试图再去延长消化时间。
3EDTA的作用。许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白,trypsin切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca2+,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法。针对如上情况,美国ScienCell公司专门配制了胰酶浓度为0.25%trypsin/EDTA消化液(T/E,货号# 0103和胰酶浓度为0.05%trypsin/EDTA消化液(T/E,货号# 0183
4PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。对于一些难消化细胞,可以配制不含Ca2+、Mg2+PBS,因为这些离子也会抑制trypsin的活性。美国ScienCell公司也有配好的不含Ca2+、Mg2+PBS,DPBS(货号#0303
5、胰酶的中和。细胞消化完之后,因为残留的胰酶对细胞有伤害作用,需要将胰酶中和掉,就需要用到胰酶中和液。美国ScienCell胰酶中和液(TNS,货号#0113,含有10%的胎牛血清作为胰酶抑制剂和细胞保护剂。

关键词:细胞消化    

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