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标题筛选稳定细胞株的3大方法!

   

提供者:上海远慕生物科技有限公司    发布时间:2019/1/17   阅读次数:381次 >>进入该公司展台

众所周知,使用混合稳定株可以获得多个不同的单克隆稳定细胞株。因为稳定整合往往伴随着插入失活宿主内源基因,所以实验时通过使用混合稳定靠谱的细胞株,或者对多个单克隆稳定细胞株进行比较,可以帮助研究人员获得更精确的实验数据。筛选稳定细胞株主要有三类方法:

筛选稳定细胞株的3大方法!


 

1:单克隆环法

此类方法多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株的实验。其优点在于工作量小,只需将转染或者病毒载体感染后的细胞按照一定的细胞密度转移至新皿中,并使用合适的药物进行筛选,最后在克隆环的帮助下对单克隆细胞株进行挑选,并在新皿中完成扩增。

2:96孔单克隆稀释法

此类方法同样多用于整合率低的转染方法或者需要得到单克隆细胞株以及筛选悬浮细胞稳定株的实验。其优点在于,理论上可以得到非常均一的单克隆,同时可以筛选悬浮细胞稳定株。其缺点在于,工作量比较大。

3:逆转录病毒混合克隆制备法

此类方法适用于需要制备混合稳定细胞株。优点在于可以在短时间内获得稳定细胞株,同时也可以随时将细胞稀释转移至新皿中获得单克隆细胞株。倾向于整合于转录起始位点附近的,容易造成下游基因的激活;而整合于转录活跃基因内的,容易导致整合区基因的插入失活。

总而言之,对于需要对细胞密度和药物浓度绘制致死曲线并选取合适的细胞密度和药物浓度进行筛选,一些细小的密度和浓度差别都会影响获取均一的单克隆细胞株,影响获取的克隆不纯,国内资深的细胞株含有非整合的细胞。稳定整合的细胞在这样一类混合细胞中,不会失去生长优势。

关键词:细胞株    

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